从“能做”到“可信”：迎接qPCR实验的新金标准——MIQE 2.0指南
发布时间：
2025-12-24
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qPCR实验的新金标准
“请提供qPCR方法的细节。”——这可能是qPCR相关论文作者在投稿时，从审稿人那里收到的最常见、也最令人心头一紧的意见之一。为什么精准的qPCR技术，其结果的报告却如此难以获得信任？原因在于2009年以前，qPCR实验缺乏统一的报告标准，导致大量论文中的关键实验信息缺失；实验结果的可重复性和可靠性也一直困扰着操作者。
为了解决这一问题，2009年英国生物学家Stephen A Bustin领衔发表了MIQE ( Minimum Information for Publication of Quantitative Real-Time PCR Experiments ) 指南，迅速成为全球qPCR实验的"黄金标准"。该论文迄今已被引用6500多次，为qPCR技术人员提供了实验设计、执行和报告的规范。但技术发展日新月异，原始MIQE指南难以满足当前研究需求。如今，这一标准已经进化。2025年，全新的MIQE 2.0版指南正式发布，标志着qPCR实验的规范化、透明化进入了新的阶段。
今天，我们一起来学习一下这个“qPCR实验的新金标准”！
01
MIQE 2.0新在哪里？核心更新要点一览
相较于旧版，MIQE 2.0在理念和细节上均有重要提升，其核心变化可总结如下：
02
深入解析：MIQE 2.0的模块实战清单
MIQE 2.0指南内容系统而全面，它将一个完整的qPCR实验分解为九大模块，共包含85个检查项（分为必须“E”和建议“D”）。下面我们来重点了解一下实验过程中常见的几大模块：
1
实验设计
公开实验细节，要求将Cq值转换为经效率校正的靶标量并附预测区间，同时明确报告每个靶标的检测限（LOD）、定量下限（LLOQ）、定量上限（ULOQ）及动态范围，以增强结果的可比性。
2
样本
因RNA易降解的特点，指南推荐组织与细胞样本快速冷冻后存于-80℃冰箱或液氮中，血液样本需存于含有RNA稳定剂的采集管中。
3
核酸提取
需描述所使用的提取试剂盒的品牌、货号、批次以及样本的处理量、洗脱缓冲液体积，并着重说明RNA提取过程中是否进行DNase处理，DNA提取过程中是否去除蛋白、多糖等杂质。
4
逆转录
需要使用RNA标准品而非DNA标准品来评估动态范围和RNA拷贝数；说明总RNA输入量、所用酶和引物类型（随机引物、Oligo dT等）及反应条件。
5
qPCR实验方案
需明确核心参数：特异性、扩增效率、线性范围、检测限（LOD）和定量限（LOQ）等。
6
数据分析
明确说明基线、阈值（Cq值）的设置方法、使用的数据分析模型（如ΔΔCq法），以及如何利用内参基因进行归一化。指南推荐使用几何均值法对参考基因进行归一化，避免ΔΔCq法可能带来的偏差，并强调PCR效率应通过标准曲线法或单反应扩增曲线法计算，且需附带置信区间。
03
如何将MIQE 2.0融入你的科研实践？
1
获取官方清单
在互联网上搜索“MIQE checklist”，找到最新的官方检查表，将其作为实验记录和论文写作的核对模板。
2
建立SOP
根据指南要求，为实验室常用的qPCR实验建立标准操作程序，确保不同成员间的操作一致性。
3
投稿附件
在向期刊投稿时，将填写完整的MIQE检查表作为补充材料提交，能极大提升评审人对你工作严谨性的认可。
结语
迈向更严谨的科学
MIQE 2.0不仅仅是一份检查清单，它更代表了一种科研文化——对透明、严谨和可重复性的承诺。在“可重复性危机”被广泛讨论的今天，主动采纳并遵循MIQE 2.0指南，是每一位使用qPCR的研究者对自己工作负责、对科学共同体贡献的最佳方式。
拥抱新标准，让你产出的每一个数据，都经得起时间的检验。
下载来这里
Bustin, Stephen A , et al. "MIQE 2.0: Revision of the Minimum Information for Publication of Quantitative Real-Time PCR Experiments Guidelines." Clinical Chemistry 6(2025):6.
https://academic.oup.com/clinchem/article/71/6/634/8119148?login=false
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