蛋白质是由氨基酸通过肽键连接形成的一级结构线性链，并通过折叠形成包括α-螺旋、β-折叠等二级结构及更高级的复杂三维构象。

这种天然构象的多样性导致蛋白质在形状、大小和表面电荷上存在差异，若直接进行电泳，其迁移速率将受多因素影响，结果难以解析。

为克服此问题，在样品制备阶段，蛋白质会在含有变性剂SDS与还原剂（如β-巯基乙醇） 的上样缓冲液中加热变性。此过程可破坏氢键、疏水作用等稳定空间结构的非共价相互作用力，并由还原剂切断二硫键，从而使蛋白质完全解折叠，形成带均匀负电荷的伸展肽链。这确保了其在凝胶中的迁移速率主要取决于分子量，显著提高了分离的准确性和可比性。

SDS作为一种强阴离子去污剂，在蛋白质完全变性解折叠后，能通过其疏水尾部与蛋白质肽链骨架定量结合，形成具有恒定电荷-质量比的SDS-蛋白质复合物。该复合物所携带的大量负电荷，极大地掩盖了蛋白质自身所带的电荷，使其在电场中的迁移速率主要取决于分子量。

煮样处理对于破坏蛋白质的疏水内核、确保其彻底解折叠至关重要，这能保证SDS的结合效率与均一性。在此理想状态下，蛋白质在凝胶中依分子量大小进行分离——分子量小的蛋白质迁移更快，分子量大的则迁移更慢。

反之，若蛋白质变性不完全，其残存的高级结构将阻碍SDS的均匀结合，导致蛋白质的迁移行为偏离线性关系，出现条带位置异常、弥散或拖尾等现象，从而严重影响分子量测定和结果分析的准确性。

提取的蛋白样品中可能潜伏着各种蛋白酶，它们会不断地降解我们想要检测的目标蛋白。等到跑胶时，可能会出现条带变弱、消失，或者条带降解的现象。

煮样通过高温使这些蛋白酶变性失活，使目标蛋白在电泳前不再被破坏，从而保证实验结果的准确性。

上样缓冲液里面通常含有甘油或蔗糖。在煮沸后，这些成分会使样品的密度变得非常大。

上样时，高密度的样品会稳稳地沉在孔底，而不会飘散出来与电泳缓冲液混合。这保证了所有蛋白都能从同一起跑线开始“奔跑”，从而确保了上样量的精确性和条带的锐利度。

总 结